ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОТЕИНА SPM2 THEILERIA ANNULATA

Abstract

Среди инфекций животных, передающихся клещами, по степени патогенности и ущерба, тейлериоз вызываемый Theileria annulata (T.annulata), является одним из наиболее злокачественных, с высоким процентом летальности. В Казахстане тейлериоз распространен в южных регионах. Высокий процент инфицированности, приводит к тому, что завозимый высокопродуктивный скот очень тяжело, с большим уровнем летальностью переносит заболевание. Среди поголовья мясного скота и овец данное заболевание приводит к резкому исхуданию животных, потере до 30% массы тела и ухудшению качества мясной продукции. Уровни удоев восстанавливаются до прежнего уровня в течение длительного срока (1-2 месяца) лишь до 80%. В рамках борьбы с тейлериозом крупного рогатого скота важным моментом является проведение систематических и достаточно масштабных серологических исследований восприимчивого поголовья, для чего необходимо наличие у ветеринарных специалистов высокочувствительных и специфичных диагностикумов.

Целью данной работы было получение рекомбинантного протеина T.annulata пригодного для использование в качестве антигена для серологической диагностики. В качестве целевого был выбран  ген кодирующий протеин спорозоит и макрошизонт 2 (spm2) Theileria annulata (a sporozoite and macroschizont gene 2 (spm2)). Ген Spm2 T. annulata участвует в инвазии спорозоитов мононуклеарные клетки периферической крови крупного рогатого скота и экспрессируются на поверхности паразита на всех стадиях жизненного цикла. Была создана экспрессионная векторная система и отработан протокол очистки рекомбинантного белка Spm2, который предполагал металл-хелатную аффинную хроматографию с посаженными ионами Ni2+. SDS-PAGE анализ очищенных проб показал достаточно высокий выход чистых препаратов рекомбинантного белка  Spm2 T. annulata с молекулярной массой 42 кДа. С целью проверки сероактивности полученного протеина, он был тестирован в качестве антигена в непрямом варианте твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА). В работе были использованы пробы плазмы крови КРС из хозяйств неблагополучного по тейлериозу региона Казахстана, в соответствующих образцах крови которых методом ПЦР, было определено наличие или отсутствие ДНК T.annulata. Сравнительный ИФА анализ 34 проб плазмы крови от ПЦР положительных животных с 10 пробами плазмы крови от ПЦР отрицательных животных из благополучного региона позволил определить отсекающее значение (cut off) и четко провести их дифференциацию. Корреляция результатов ИФА с данными ПЦР анализа, говорит о перспективности полученного антигена и необходимости дополнительных исследований по изучению его специфичности и возможности использования в качестве компонента ИФА тест-системы.