СТАНДАРТИЗАЦИЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ ПЕРИПЛАЗМАТИЧЕСКИХ БЕЛКОВ БРУЦЕЛЛ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ.
Main Article Content
Authors
Г.К. Каукабаева
Национальный центр биотехнологии, Республика Казахстан, 010000, г.Астана, Кургальжинское шоссе 13/5
Государственный университет имени Шакарима города Семей
С.З. Ескендирова
Национальный центр биотехнологии, Республика Казахстан, 010000, г.Астана, Кургальжинское шоссе 13/5
А.К. Булашев
Казахский агротехнический исследовательский университет имени С.Сейфуллина
Е. Билялов
Государственный университет имени Шакарима города Семей
Ш.Е. Мухлис
Национальный центр биотехнологии, Республика Казахстан, 010000, г.Астана, Кургальжинское шоссе 13/5
А.Е. Мухамбетова
Национальный центр биотехнологии, Республика Казахстан, 010000, г.Астана, Кургальжинское шоссе 13/5
Ж.С. Ахметкаримова
Национальный центр биотехнологии, Республика Казахстан, 010000, г.Астана, Кургальжинское шоссе 13/5
А.К. Нуркина
Национальный центр биотехнологии, Республика Казахстан, 010000, г.Астана, Кургальжинское шоссе 13/5
А.С. Темирова
Государственный университет имени Шакарима города Семей
Abstract
Бруцеллез является актуальной проблемой животноводства нашей страны вследствие низкой специфичности и объективности используемых серологических методов. Одним из потенциалов повышения чувствительности и специфичности иммуноферментной диагностики бруцеллезной инфекции наиболее эффективно применение комплекса иммунодоминантных белков бруцелл, серологически активных на различных стадиях заболевания.
Осуществлена препаративная наработка, выделение и очистка рекомбинантных антигенов – периплазматических белков бруцелл. Проведена оптимизация и стандартизация концентрации иммунокомпонентов и параметров протокола постановки иммуноферментной тест-системы.
Иммуноферментная тест-система на основе комбинации рекомбинантных антигенов бруцелл показала высокую аналитическую чувствительность определения противобруцеллезных антител во всех коммерческих позитивных контрольных референс-сыворотках – международной бруцеллезной референс-сывороткой, моноспецифическими anti-abortus и anti-melitensis, коммерческими бруцеллезными сыворотками крови («Щелковский биокомбинат», «Покровский завод биопрепаратов» и НПО «Антиген»). Высокие титры сывороточных антител в непрямом ИФА соответствовали уровню специфической активности серопозитивных референс-сывороток (исходным характеристикам, указанных сертификатом производителя). Достоверность результатов выявления зараженных бруцеллезом животных испытуемым ИФА подтверждена показателями серологической активности пяти сывороток крови аборт-плодов с выделенной гемокультурой бруцелл из цельной крови и положительной ПЦР.
Аналитическая специфичность иммуноферментной тест-системы (способность дифференцировать целевой аналит - специфические противобруцеллезные антитела в исследумом образце) определяли путем тестирования перекрестной реактивности с гетерологичными сыворотками животных, инфицированных родственными видами микроорганизмов – Yersinia enterocolitica 09, Escherichia coli и Salmonella . Аналитическая специфичность детекции противобруцеллезных антител в непрямом ИФА подтверждена отрицательными значениями оптической плотности (ОП) всех коммерческих негативных контрольных референс-сывороток и гетерологичных сывороток крови, инфицированных родственными видами микроорганизмов – Yersinia enterocolitica 09, Escherichia coli и Salmonella .
Осуществлена оценка диагностической эффективности иммуноферментной тест-системы на 1785 образцах сывороток крови от естественно инфицированных бруцеллезом животных из неблагополучных хозяйств и 877 образцах отрицательных сывороток крови животных из благополучных хозяйств из различных регионов страны. Результаты проведенных исследований подтверждает, что испытуемая иммуноферментная тест-система способна достоверно выявлять специфические противобруцеллезные антитела у инфицированных животных и подтверждать серонегативность животных.