ПРИМЕНЕНИЕ ЛЮМИНЕСЦЕНТНО-МИКРОСКОПИЧЕСКОГО И ИММУНОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ НЕТОЗА ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ (ДОКЛАД ПОДГОТОВЛЕН ПРИ ПОДДЕРЖКЕ ГРАНТА РОССИЙСКОГО НАУЧНОГО ФОНДА № 23-25-10043)

Abstract

Нетоз – вид программируемой клеточной смерти нейтрофильных лейкоцитов, сопровождающейся выбросом нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ) и играющий значительную роль в механизмах развитии многих инфекционных заболеваний, в том числе туберкулеза. При этом, несмотря на имеющиеся особенности развития туберкулезной инфекции в детском возрасте, процесс образования НВЛ практически не изучен в этой возрастной группе.

Для исследования нетоза была предложена запатентованная коллективом авторов методика оценки НВЛ, полученных при воздействии неспецифического антигенного стимулятора – культуры микроорганизмов Lactobacillus reutri, L. acidophilius, L. rhamnosis и Bifidumbacterium longum на нейтрофильные лейкоциты, выделенные из перифирической венозной крови на градиенте плотности раствора фиколла-верографина. Вне- и внутриклеточную ДНК визуализировали при помощи    интеркалирующего красителя йодида пропидия, нейтрофильные лейкоциты – при помощи моноклональных антител к CD15, меченных флуоресцентным красителем FITC. 

При сравнительном исследовании, проведенном с помощью данной методики у взрослых и детей (4-7 лет), больных туберкулезом было выявлено, что у детей нейтрофилы при воздействии неспецифического антигенного стимулятора интенсивнее, чем у взрослых, формировали нитевидные НВЛ (p=0,0131). При этом было обнаружено, что преимущественно нитевидные НВЛ формировались и у здоровых детей из группы контроля, но в меньшем количестве, чем у детей у диагностированным первичным туберкулёзным комплексом (p=0,0046). Напротив, нейтрофилы взрослых с инфильтративной или очаговой формой туберкулеза чаще формировали облаковидные НВЛ (p=0,0000).

Также было обнаружено, что в группе с латентной туберкулезной инфекцией нетозобразующая способность нейтрофилов была выше в сравнении с контрольной группой.  У данной группы детей также чаще наблюдались нитевидные НВЛ (p=0,0297).

Цитруллинированный гистон Н3 (citH3) – продукт посттрансляционной модификации белков, имеющей место в том числе в процессе нетоза. Уровни citH3 оценивали  в периферической крови с помощью тест-системы «Citrullinated Histone H3 (Clone 11D3) ELISA Kit» (Cayman Chemical Company, США). Была выявлена сильная корреляционная взаимосвязь между концентрацией citH3 и формированием нитевидных НВЛ (r=0,86; p=0,0137).

Таким образом, обе рассматриваемые методики могут использоваться для исследования туберкулезной инфекции у детей, показывая достаточно высокую степень сходимости результатов.