ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЛИПОПОЛИСАХАРИДНОМУ АНТИГЕНУ САЛЬМОНЕЛЛ
Main Article Content
Authors
А.М. Тургимбаева
РГП «Национальный центр биотехнологии РК», г. Астана
Евразийский национальный университет им. Л.Н. Гумилева, г. Астана
Г.К. Каукабаева
РГП «Национальный центр биотехнологии РК», г. Астана
Г.А. Бакирова
РГП «Национальный центр биотехнологии РК», г. Астана
Abstract
На предыдущих этапах работы из бактериальных масс S. typhimurium и S. enteritidis методом водно-фенольной экстракции по O. Westphal получили липополисахаридный антиген. Выход антигена в зависимости от количества бактериальной массы составил от 0,750 до 1,5 мг. Данная методика выделения липополисахарида позволяла получать достаточно чистые углеводы. Результаты окрашивания серебром ПААГ четко показывают ступенчатую модель полос с несколькими ступенями, что говорит о гладком типе грамотрицательных бактерий. Результаты окрашивания полиакриламидного геля красителем Кумасси показало отсутствие контаминирующих бактериальных белков. Полученный ЛПС антиген обладает достаточно высокой антигенной активностью. Схема иммунизации концентрацией антигена 50 мкг/мл способствует выработке достаточного количества сывороточных антител с высокой степенью их сродства к использованному антигену. Использованная схема иммунизации мышей линии BALB/c липополисахаридными антигенами S. typhimurium и S. enteritidis пригодна для стимулирования иммунной системы подопытных животных на выработку достаточного количества антител против использованных антигенов. Титры специфических антител в сыворотке крови мышей, иммунизированных ЛПС антигеном S. typhimurium и S. enteritidis, в ИФА достигали 1:25600 и 1:12800 соответственно. Гибридизацию лимфоцитов мышей с миеломными клетками линии X63-Ag8.653 проводили в присутствии ПЭГ-4000. Выход клонов гибридом, обладающих антительной продуктивностью, в наших опытах находился в пределах 6,41–7,62%, что свидетельствует о довольно высоком иммунном фоне пула лимфоцитов и о возможности изолирования активных клонов с желаемыми свойствами.
Таким образом, методом гибридомной технологии получены активные штаммы гибридных клеток, стабильно синтезирующих моноклональные антитела к липополисахаридным антигенам S.typhimurium и S.enteritidis.
Keywords
сальмонеллы, липополисахарид, моноклональные антитела
Article Details
References
Шуляк Б.Ф. Традиционные и новые подходы к лабораторной диагностике сальмонеллеза // Журнал «Справочник заведующего КДЛ». - 2009. - №12. - С. 21-26.
Yang Hong, Tongrui Liu, Margie D Lee et al. Rapid screening of Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg and Typhimurium using a serologically-correlative allelotyping PCR targeting the O and H antigen alleles // BMC Microbiology. – 2008. - №8. - Р.178.
Яцышина С.В. Выявление и типирование возбудителей сальмонеллеза молекулярно-генетическими методами: дис. … канд. биол. наук: 16.00.03. – М., 2003. - 112 с.
Бровкина А.Н. Контроль возбудителей острых кишечных инфекций на основе иммунохроматографического метода // Научный журнал КубГАУ. – 2011. - №72 (08). – С. 1-8.
Кеннет Р.Г., Мак-Керн Д., Бехтов К. Моноклональные антитела // Гибридомы: Новый уровень биологического анализа / пер. с англ. Е.Д. Айгорн. – М.: Медицина, 1983. – 416 с.
Игнатьев С.В. Моноклональные антитела // Ветеринария. – 1990. - №8. – С. 27-33.
Федоров Ю.Н., Верховский Д.А., Феоктисова Т.А. Моноклональные антитела – новый путь в иммунодиагностике и иммунопрофилактике инфекционных болезней животных // Сельхоз. биология. – 1990. - №2. – С. 22-30.
Андросова М.В. Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела с различной специфичностью к микобактериям туберкулеза человеческого и бычьего видов // Антибиотики и химиотерапия. – 1988. - №5. – С. 352-355.
Дробышевская Э.И. Получение моноклональных антител к антигенным детерминантам полисахарида стрептококка группы А // Актуальные вопросы иммунологии: сб. научн. Трудов. - Р.-на-Д., 1988. – С. 18-19.
Hammerberg C., Schurig G. Characterization of monoclonal antibodies directed against swine Leukocytes // Vet. Immunol. Immunopathol. – 1986. – Vol. 11, №2. – P. 107-121.
Fogel N., Kleemm P., Elling F. Passive immunization of newborn pigiets with anti- K88 murine monoclonal antibodies // Proc. World Vet. Congress. – Barselona, 1986. – P. 131-149.
Раевская М.В., Белая Ю.А., Ковальчук Н.В., Петрухин В.Г., Черноусова Л.Н. Получение и характеристика мышиных моноклональных антител к K-антигену Salmonella typhimurium // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 1994. - №6. – С. 633-635.
Nalbantsoy А., Karaboz I., Deliloglu I. Production of Monoclonal Antibodies in a Mouse Model via Lipopolysaccharide Conjugates with Synthetic Polymers Specific to Salmonella Enteritidis O Antigen // Foodborne pathogens and disease. - 2010. - Vol. 7, №12. –Р. 1521-1529.
Раевская М.В., Белая Ю.А., Ковальчук Н.В. Получение моноклональных антител к О-антигену Salmonella typhimurium серогруппа (0-4;5) // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 1994. - №6. – С. 630-632.
Oi V., Herzenberg L. et al. Immunoglobulin – producing hybrid cell lines // Selected methods in cellular immunology // ed. By. Mishell B. and Shiigi. – San Francisco, 1980. – P. 351-352.