ПОЛУЧЕНИЕ И АНАЛИЗ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К РЕКОМБИНАНТНОМУ ТРАНСКРИПЦИОННОМУ ФАКТОРУ SOX2
Main Article Content
Authors
А.Е. Секенова
РГП «Национальный центр биотехнологии» КН МОН РК, г. Астана
Евразийский национальный университет им. Л.Н. Гумилева, г. Астана
М.Ж. Балтабекова
РГП «Национальный центр биотехнологии» КН МОН РК, г. Астана
Б.Б. Хасенов
РГП «Национальный центр биотехнологии» КН МОН РК, г. Астана
В.Б. Огай
РГП «Национальный центр биотехнологии» КН МОН РК, г. Астана
Abstract
Транскрипционный фактор Sox2, который экспрессируется в эмбриональных стволовых клетках, играет важную роль в самообновлении и поддержании плюрипотентности эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. В данном исследовании методом плазмидной экспрессии бактериального штамма Rosetta pLysS(DE3), несущего генетическую конструкцию рЕТ-28а/Sox2, был наработан рекомбинантный транскрипционный фактор Sox2. Целевой ген Sox2 был встроен под контроль промотора РНК полимеразы Т7 и содержал гистидиновую метку с N-конца и полиаргининовый мотив с С-конца. Данный рекомбинантный белок Sox2 использовали для получения поликлональных антител, специфичных к транскрипционному фактору Sox2. Результаты иммуноферментного анализа показали высокий уровень антителообразования при иммунизации рекомбинантным белком Sox2. Результаты иммуноблота показали, что полученные поликлональные антитела связываются с антигенной фракцией, молекулярная масса которой равна 35 кДа. Методом иммуноцитохимического анализа было определено, что поликлональные антитела имеют высокую специфичность связывания с нативным транскрипционным фактором Sox2 в эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клетках. Полученные очищенные поликлональные антитела имеют высокую специфичность связывания с рекомбинантным антигеном Sox2, чем неочищенные поликлональные сыворотки. С помощью полученных антител нами была подтверждена их специфичность и избирательность на клеточных линиях ЭСК и ИПСК в качестве маркеров стволовых клеток. Таким образом, наши результаты показали, что полученные нами поликлональные антитела к Sox2 не уступают по специфичности и иммунохимическим характеристикам коммерческому аналогу и могут быть использованы для определения экспрессии данного транскрипционного фактора в плюрипотентных стволовых клетках.
Keywords
Sox2, антиген, антитела, плюрипотентные стволовые клетки
Article Details
References
Takahashi K., Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors // Cell. – 2006. - №126 (4). – Р. 663–676.
Niwa H., Ogawa K., Shimosato .D, Adachi K. A parallel circuit of LIF signalling pathways maintains pluripotency of mouse ES cells // Nature. – 2009. - №460 (7251). – Р. 118–22.
Masui S., Nakatake Y., Toyooka Y., Shimosato D., Yagi R, Takahashi K., Okochi H., Okuda A., Matoba R., Sharov A., Ko MS., Niwa H. Pluripotency governed by Sox2 via regulation of Oct3/4 expression in mouse embryonic stem cells // Nat. Cell Biol. - №9 (6): 625–635.
Chambers I., Tomlinson SR. The transcriptional foundation of pluripotency // Development. - 2009. - №136 (14). – Р. 2311–22.
Brazel C.Y., Limke T.L., Osborne J.K., Miura T., Cai J., Pevny L., Rao M.S. Sox2 expression defines a heterogeneous population of neurosphere-forming cells in the adult murine brain // Aging Cell. - 2005. – Aug. - №4(4). – Р. 197-207.
Cai J., Olson J.M., Rao M.S., Stanley M., Taylor E. and Ni H. Development of antibodies to human embryonic stem cell antigens // BMC Developmental Biology. - 2005. – Р. 5-26.
Rizzino A. Sox2 and Oct-3/4: a versatile pair of master regulators that orchestrate the self-renewal and pluripotency of embryonic stem cells // Wiley Interdiscip Rev SystBiol Med. -2009. - №1 (2). – Р. 228–36.
Балтабекова М.Ж., Абдуллаева В.Н., Хасенов Б.Б. Экспрессия генов человеческих белков SOX2 и NANOG в Еsherichia coli // Материалы конференции «Генетика и биотехнология ХХI века: проблемы, достижения, перспективы». - 2012. - С. 183.
Tomohisa Seki, Shinsuke Yuasa & Keiichi Fukuda. Generation of induced pluripotent stem cells from a small amount of human peripheral blood using a combination of activated T cells and Sendai virus // Nature protocols. – 2012. - Vol.7, №4. – Р. 718-28.
Lei Lei, Cui Xinxin, Zhang Shujin, Wang Huayan. Prokaryotic Expression of Mouse Sox2 Gene and Preparation of Its Polyclonal Antibody // Journal of Agricultural Biotechnology. – 2010. - Vol.18, №6. – Р. 1163-1167.