СТАНДАРТИЗАЦИЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ ПЕРИПЛАЗМАТИЧЕСКИХ БЕЛКОВ БРУЦЕЛЛ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ. - Каукабаева, Г.К.; Ескендирова, С.З.; Булашев, А.К.; Билялов, Е.; Мухлис, Ш.Е.; Мухамбетова, А.Е.; Ахметкаримова, Ж.С.; Нуркина, А.К.; Темирова, А.С. (Eurasian Journal of Applied Biotechnology, 2024)
Бруцеллез является актуальной проблемой животноводства нашей страны вследствие низкой специфичности и объективности используемых серологических методов. Одним из потенциалов повышения чувствительности и специфичности иммуноферментной диагностики бруцеллезной инфекции наиболее эффективно применение комплекса иммунодоминантных белков бруцелл, серологически активных на различных стадиях заболевания. Осуществлена препаративная наработка, выделение и очистка рекомбинантных антигенов – периплазматических белков бруцелл. Проведена оптимизация и стандартизация концентрации иммунокомпонентов и параметров протокола постановки иммуноферментной тест-системы. Иммуноферментная тест-система на основе комбинации рекомбинантных антигенов бруцелл показала высокую аналитическую чувствительность определения противобруцеллезных антител во всех коммерческих позитивных контрольных референс-сыворотках – международной бруцеллезной референс-сывороткой, моноспецифическими anti-abortus и anti-melitensis, коммерческими бруцеллезными сыворотками крови («Щелковский биокомбинат», «Покровский завод биопрепаратов» и НПО «Антиген»). Высокие титры сывороточных антител в непрямом ИФА соответствовали уровню специфической активности серопозитивных референс-сывороток (исходным характеристикам, указанных сертификатом производителя). Достоверность результатов выявления зараженных бруцеллезом животных испытуемым ИФА подтверждена показателями серологической активности пяти сывороток крови аборт-плодов с выделенной гемокультурой бруцелл из цельной крови и положительной ПЦР. Аналитическая специфичность иммуноферментной тест-системы (способность дифференцировать целевой аналит - специфические противобруцеллезные антитела в исследумом образце) определяли путем тестирования перекрестной реактивности с гетерологичными сыворотками животных, инфицированных родственными видами микроорганизмов – Yersinia enterocolitica 09, Escherichia coli и Salmonella . Аналитическая специфичность детекции противобруцеллезных антител в непрямом ИФА подтверждена отрицательными значениями оптической плотности (ОП) всех коммерческих негативных контрольных референс-сывороток и гетерологичных сывороток крови, инфицированных родственными видами микроорганизмов – Yersinia enterocolitica 09, Escherichia coli и Salmonella . Осуществлена оценка диагностической эффективности иммуноферментной тест-системы на 1785 образцах сывороток крови от естественно инфицированных бруцеллезом животных из неблагополучных хозяйств и 877 образцах отрицательных сывороток крови животных из благополучных хозяйств из различных регионов страны. Результаты проведенных исследований подтверждает, что испытуемая иммуноферментная тест-система способна достоверно выявлять специфические противобруцеллезные антитела у инфицированных животных и подтверждать серонегативность животных.